Gracias por visitar nature.com.Está utilizando una versión de navegador con soporte limitado para CSS.Para obtener la mejor experiencia, le recomendamos que utilice un navegador más actualizado (o desactive el modo de compatibilidad en Internet Explorer).Mientras tanto, para garantizar un soporte continuo, mostramos el sitio sin estilos ni JavaScript.Scientific Reports volumen 12, Número de artículo: 15216 (2022) Citar este artículoLa trifloxistrobina (TFS) es un fungicida de tipo estrobilurina que debe investigarse debido a sus riesgos para los organismos a los que no se dirige.El objetivo de este estudio fue evaluar la susceptibilidad de Allium cepa L. a TFS en un enfoque múltiple.Durante 72 h, se administraron dosis de 0,2 g/L, 0,4 g/L y 0,8 g/L de TFS a bulbos de A. cepa y el grupo control se trató con agua del grifo.Se probaron los efectos tóxicos de TFS, considerando análisis fisiológicos, citogenéticos, bioquímicos y anatómicos.TFS retrasó el crecimiento al reducir la tasa de enraizamiento, la elongación de la raíz y el aumento de peso.Después de los tratamientos con TFS, las puntuaciones del índice mitótico (MI) disminuyeron, mientras que la formación de micronúcleos (MN) y aberraciones cromosómicas (CA) ascendieron.Los tipos de CA inducidos por TFS se enumeraron según su frecuencia como fragmento, cromosoma errante, cromosoma pegajoso, distribución desigual de la cromatina, puente, núcleo con vacuolas, polarización inversa y mitosis irregular.TFS provocó un incremento en las actividades de las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT), así como una acumulación de malondialdehído (MDA).Las células meristemáticas de las raíces de A. cepa tratadas con TFS tenían varios daños anatómicos, que incluían epidermis dañada, núcleo celular aplanado, corteza dañada y grosor en la pared celular de la corteza.Todos los daños derivados de los tratamientos con TFS mostraron dependencia de la dosis.Los hallazgos del presente estudio revelaron la grave toxicidad de TFS en una planta no objetivo.No se debe descuidar la evaluación de los peligros potenciales de TFS con diferentes pruebas de toxicidad.Actualmente, el método más prevalente aplicado para proteger las plantas contra enfermedades y plagas en las prácticas agrícolas es el uso de pesticidas1.Se necesitan nuevos productos químicos con diferentes mecanismos de acción para combatir la plaga resistente que surge como resultado de este uso generalizado.Uno de los nuevos fungicidas desarrollados para este fin son las estrobilurinas, que se originan a partir del hongo de la pudrición de la madera Strobilurus tenecellus2.Debido a su capacidad para combatir con éxito una amplia variedad de enfermedades fúngicas, las estrobilurinas son los fungicidas agrícolas más vendidos en todo el mundo2,3.Las estrobilurinas, que sirven en el mercado mundial de fungicidas con muchos miembros diferentes y están en constante desarrollo, tienen un mecanismo de acción de tan amplio espectro que inducen algunos efectos no deseados4.La trifloxistrobina (TFS), como fungicida de estrobilurina, se une a la región (Qo) del complejo III y detiene las actividades respiratorias en las mitocondrias.Como resultado, interrumpe el ciclo de energía vital en hongos al inhibir la generación de trifosfato de adenosina en hongos5.TFS se usa ampliamente en cultivos como arroz, cereales, frutas, verduras, uvas, papas y soja para combatir el tizón de la vaina y el hongo del añublo del arroz6.Los fungicidas tipo estrobilurinas como TFS pueden causar contaminación ambiental debido a su uso intensivo, así como a su capacidad de permanecer en el agua, el aire, el suelo y los productos después de ser aplicados a las plantas7.A pesar de todas sus ventajas, TFS tiene una tasa de hidrólisis lenta en ambientes no ácidos, por lo que su vida media puede ser de varios años como ácido de trifloxistrobina (TFSA)6.Además, TFSA, el principal metabolito de TFS, es más soluble en agua y es más peligroso para el medio ambiente que TFS8.Por lo tanto, existe una creciente preocupación por los efectos adversos en humanos y organismos no objetivo debido a la contaminación de los alimentos y el medio ambiente con TFS.Aunque se considera que TFS tiene baja toxicidad para los mamíferos, las aves y las abejas, hay estudios que muestran una alta toxicidad para los organismos acuáticos y del suelo9.Existe una brecha de conocimiento considerable con respecto a la toxicidad inducida por TFS en organismos terrestres y humanos.TFS se aplica a menudo en combinación con diferentes fungicidas para controlar la enfermedad de A. cepa L., descrita como la "reina de la cocina"10,11,12.Sin embargo, los bulbos saludables de A. cepa también son un excelente material de prueba para monitorear los efectos dañinos de los químicos.Debido a la dificultad y los problemas éticos de probar la toxicidad de los productos químicos en humanos, se han desarrollado sistemas de prueba basados ​​en varios tipos de bioindicadores.Una de las especies indicadoras más importantes es A. cepa, con sus pocos y fácilmente visibles cromosomas.La administración de la prueba Allium para analizar la toxicidad potencial y la genotoxicidad de varios tipos de agentes químicos está muy extendida y tiene una larga historia.Es más rentable y proporciona una mayor cantidad de datos en comparación con los ensayos basados ​​en animales.También proporciona resultados similares y comparables a los obtenidos a partir de líneas celulares animales13.El objetivo del presente estudio fue monitorear la potencia tóxica del fungicida TFS en la planta modelo A. cepa.Se logró evaluando los parámetros fisiológicos, citogenéticos y bioquímicos.El efecto de TFS en la fisiología de los bulbos se determinó utilizando la tasa de enraizamiento, elongación de la raíz y ganancia de peso, mientras que las aberraciones cromosómicas (CA), el micronúcleo (MN) y el índice mitótico (MI) se utilizaron para evaluar los efectos del fungicida en los parámetros citogenéticos de las raíces de A. cepa.Los niveles de malondialdehído (MDA) para la peroxidación lipídica y las actividades de superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT) se utilizaron como indicadores bioquímicos de toxicidad.Además, las lesiones meristemáticas inducidas por TFS en las puntas de las raíces de A. cepa también se examinaron mediante secciones transversales.A. cepa var.bulbos aggregatum (2n = 16), obtenidos de un mercado local en Giresun-Turquía.Los bulbos de cebolla utilizados en el estudio fueron probados directamente sin ser almacenados en el laboratorio.Las soluciones experimentales se prepararon utilizando una fórmula disponible comercialmente "Trailer" que contenía un 50 % de contenido de trifloxistrobina (Hektaş Group, Kocaeli-Turquía).Todos los demás productos químicos utilizados en este estudio fueron de grado analítico.El uso de plantas y los experimentos en el presente estudio cumplen con las directrices internacionales, nacionales e institucionales pertinentes.Se formaron cuatro grupos experimentales utilizando bulbos de cebollas sanas y de tamaño similar (11 ± 1 g).Cada grupo contenía cincuenta bulbos y se expuso a soluciones acuosas de TFS de 0,2 g/L, 0,4 g/L y 0,8 g/L, respectivamente.El fungicida se aplicó en dosis más altas que en el campo para monitorear los posibles efectos adversos a largo plazo de TFS en organismos no objetivo en condiciones de laboratorio y en poco tiempo.Las dosis de TFS se determinaron mediante estudios preliminares considerando la relación de enraizamiento y la elongación de la raíz.El grupo de control fue tratado con agua del grifo.Los bulbos se colocaron en tubos de vidrio llenos con las respectivas soluciones y se mantuvieron en la oscuridad a temperatura ambiente durante 72 h.Las soluciones se renovaban diariamente.Al final del período experimental, se calcularon la relación de enraizamiento, la elongación de la raíz y el aumento de peso para investigar los cambios fisiológicos causados ​​por TFS en los bulbos.Para calcular la tasa de enraizamiento, se determinó la relación entre el número de cebollas enraizadas y el número total de cebollas, y el resultado se dio como porcentaje14.El aumento de peso medio y la elongación de la raíz de diez bulbos seleccionados al azar de cada grupo se midieron utilizando una escala de precisión y una regla, respectivamente15.Para investigar los efectos citotóxicos y genotóxicos causados ​​por TFS, se determinaron los cambios en las frecuencias de MN y CA junto con el valor de MI.Todos estos parámetros fueron analizados en los mismos portaobjetos preparados por el método sugerido por Staykova et al.16.Cuando terminó el período de enraizamiento de tres días, se tomó 1 cm de las puntas de las raíces recién emergidas de A. cepa y se fijaron con fijador de Clarke (3: etanol/1: ácido acético glacial) durante 2 h.Las raíces se hidrolizaron durante 12 min a 60 °C en HCl 1 N en un baño de agua caliente antes de teñirse durante 16 h con una solución de acetocarmín al 1%.Las preparaciones examinadas bajo el microscopio óptico (Irmeco, IM-450 TI) fueron preparadas por el método de preparación de calabaza.Los cambios en las formaciones de MN y CA se determinaron contando 100 células en cada uno de los diez portaobjetos (1000 células en total) seleccionados de cada grupo.Los cambios en los valores de MI se determinaron contando 1000 células en cada uno de los diez portaobjetos (10 000 células en total) seleccionados de cada grupo.Se controló el nivel de malondialdehído (MDA) como indicador de peroxidación lipídica en las membranas celulares.Los análisis de los niveles de MDA en las muestras se realizaron según el método de Unyayar et al.17.Se homogeneizaron 0,5 g del material de muestra en 1 mL de ácido tricloroacético (TCA) (5%) y luego se centrifugó durante 15 min a 12.000 rpm a temperatura ambiente para obtener el sobrenadante.La mezcla que contenía volúmenes iguales de TCA sobrenadante (20 %) y ácido tiobarbitúrico (0,5 %) se hirvió durante 25 min.Después de detener la reacción, el tubo que contenía la mezcla se colocó en un baño de hielo y se centrifugó a 10.000 rpm durante 5 min.La absorbancia del sobrenadante recién obtenido se determinó a 532 nm.Los niveles de MDA se expresaron como micromolar por gramo de peso fresco.El análisis de peroxidación lipídica se realizó por triplicado.Para determinar el balance oxidativo en las células expuestas a TFS, se monitorearon las actividades de SOD y CAT junto con la acumulación de MDA.La extracción de las enzimas se realizó según el método de Zou et al.18.Los materiales de raíz (0,2 g) sometidos a congelación con nitrógeno líquido se trituraron en tampón de fosfato de sodio (2 ml; 50 mM; pH 7,8).Para separar el sobrenadante se realizó un proceso de centrifugación (14.000 rpm; 4 °C; 20 min).Se recogió el sobrenadante que contenía las enzimas SOD y CAT.El método para analizar la actividad de SOD se modificó ligeramente del ensayo de Beauchamp y Fridovich19.Se mezcló tampón de fosfato de sodio (1,5 ml; 0,05 M; pH 7,8) con una solución premezclada que contenía agua destilada, EDTA-Na2, riboflavina, metionina, cloruro de nitroazul de tetrazolio y polivinilpirrolidona.Después de agregar la enzima (0.01 mL) al medio, el tubo que contenía el medio de reacción se colocó frente a una lámpara fluorescente con una intensidad de 375 μmol/m2/s.Después de dejar que la reacción continuara durante 15 minutos, se midió la absorbancia a una longitud de onda de 560 nm.La actividad de SOD total se calculó y presentó como unidad por mg de peso fresco.Cada paso del análisis se realizó diez veces.El método para analizar la actividad CAT se modificó a partir del ensayo de Beers y Sizer20.Se mezcló tampón de fosfato de sodio (1,5 ml; 0,2 M; pH 7,8) con una solución premezclada que contenía peróxido de hidrógeno y agua destilada.Se permitió que se iniciara la reacción que agotaba el peróxido de hidrógeno añadiendo la enzima (0,2 ml) al medio.La disminución se observó instantáneamente en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 240 nm.La actividad CAT total se calculó y presentó como OD240 nm minuto por gramo de peso fresco.Cada paso del análisis se realizó diez veces.Los residuos de plaguicidas se eliminaron lavando las raíces.Después del paso de limpieza, las secciones transversales de las raíces se tomaron manualmente para obtener las diferencias anatómicas entre los grupos.Se dejó caer colorante azul de metileno (3%) sobre las células para teñirlas.Las preparaciones que contenían las secciones de raíces teñidas se examinaron bajo el microscopio óptico (Irmeco, IM-450 TI).La intensidad de las lesiones inducidas por TFS se expresó como: sin daños, levemente dañados, moderadamente dañados y críticamente dañados.Los datos de los análisis experimentales (expresados ​​como media ± desviación estándar en las tablas) se sometieron a ANOVA y al sistema de prueba de Duncan (SPSS 23 Software) para determinar si había diferencias significativas entre las medias (p < 0,05).Se determinó la relación de enraizamiento, el nivel de elongación de raíces y el aumento de peso de los bulbos para conocer los efectos de TFS sobre parámetros fisiológicos (Cuadro 1).La proporción de enraizamiento de los bulbos en el grupo de control fue del 100%, lo que indica que en el experimento se utilizaron bulbos extremadamente saludables.En los grupos de tratamiento, a medida que aumentaba la dosis de TFS, disminuía la tasa de enraizamiento de los bulbos.De hecho, el grupo tratado con 0,8 g/L de TFS mostró solo un índice de enraizamiento del 45 %.La dependencia de la dosis en el retraso del crecimiento también se observó en el alargamiento de la raíz y el aumento de peso, similar a la proporción de enraizamiento.El grado de elongación de raíces del grupo TFS 0.2 g/L disminuyó a la mitad que el del grupo control, mientras que la máxima supresión en elongación de raíces se determinó en TFS 0.8 g/L.Aunque los pesos medios iniciales de los grupos fueron cercanos entre sí, hubo diferencias significativas entre los pesos finales.Los niveles de reducción en el aumento de peso de los grupos fueron del 33 % en el grupo de TFS 0,2 g/L, del 49 % en el grupo de TFS 0,4 g/L y del 71 % en el grupo de TFS 0,8 g/L en comparación con el grupo de control.El único factor que afectó la ganancia de peso total fue la longitud de las raíces, ya que las hojas aún no aparecían al final de las 72 h de tratamiento.No se observó deformación, pérdida de agua o cambio de color en las raíces o bulbos.Las estrobilurinas, incluidas TFS y Azoxystrobin, son protectores maravillosos que inhiben la germinación de esporas para proteger las semillas y las partes vegetativas de las plantas21,22, cuando se usan en las dosis y métodos adecuados.Sin embargo, Anstis y Wicks23 demostraron que la azoxistrobina puede desencadenar fitotoxicidad según el método de aplicación y la tasa en las plantas de cebolla.También se ha comprobado que TFS puede ejercer efectos fitotóxicos en algunos cultivares de uva como los árboles Vitis labrusca y Malus24,25.También se ha informado que los efectos fitotóxicos del fungicida se exacerban durante el estrés por sequía25.Nuestros resultados concuerdan con el estudio de Rao et al.26, que mostró que la mezcla de TFS y Tebuconazol provocó un evidente retraso en el crecimiento de las plántulas de Capsicum annuum L..TFS es una sustancia química que tiene un efecto limitante sobre la respiración mitocondrial al bloquear el sistema de transporte de electrones (ETS).Dado que todas las plantas tienen este sistema como organismos eucariotas, TFS tiene al menos una supresión parcial de ETS, como se mostró previamente en las mitocondrias aisladas de Triticum aestivum L.27,28.Nason et al.29 informaron que el sitio de bloqueo de las estrobilurinas en ETS es el complejo citocromo bc1, lo que resulta en una producción disminuida de ATP.Los resultados de este estudio sugieren que la restricción inducida por TFS en la producción de energía mitocondrial puede prevenir la producción de energía necesaria para el crecimiento.El deterioro en la ganancia de energía mitocondrial puede haber ralentizado los eventos de crecimiento, como el alargamiento de la raíz y el aumento de peso, al inhibir tanto la división celular como la absorción de agua en la planta.El aumento de peso del bulbo está directamente relacionado con el desarrollo de la raíz ya que proporciona el agua necesaria para el crecimiento de la planta.La genotoxicidad es uno de los puntos finales para manifestar el potencial tóxico de los contaminantes30.Los resultados del análisis de genotoxicidad mostraron que TFS era genotóxico desde la dosis más baja hasta la dosis más alta administrada a A. cepa.MI es un parámetro utilizado para estimar los cambios en la tasa de proliferación celular debido al efecto citotóxico de los contaminantes31.Todas las dosis de TFS causaron disminuciones significativas y dependientes de la concentración en MI (Fig. 1).La ralentización de la elongación de la raíz puede ser una consecuencia directa de la reducción de MI.Muchos investigadores32,33,34 han informado una disminución de MI relacionada con fungicidas en A. cepa, mientras que el efecto de TFS en MI de células de cebolla no se ha estudiado hasta ahora.Sin embargo, los ensayos de citotoxicidad demostraron que TFS era de 50 a 150 veces más citotóxico que los triazoles en células de ovario de hámster chino35.Morejohn et al.36 informaron que los pesticidas inhiben la síntesis de microtúbulos y reducen la tasa de mitosis al interactuar con las proteínas vegetales de tubulina.Por lo tanto, se cree que la disminución de MI puede deberse a que TFS bloquea la síntesis de microtúbulos.Cambios en MI inducidos por Trifloxystrobin.Los promedios que se muestran con letras diferentes (a–d) son significativamente diferentes en p < 0.05).El fungicida condujo a un aumento significativo en la formación de MN en todos los grupos expuestos a TFS (Fig. 2a, Tabla 2).Si bien no se observó MN en el grupo de control, la frecuencia de MN aumentó a medida que aumentaba la dosis de exposición de TFS en los grupos de tratamiento.La prueba MN es un método bien establecido para la detección de trastornos a nivel cromosómico y se basa en la identificación de inclusiones redondeadas, diminutas y teñibles conocidas como "micronúcleos"37.Es un marcador fiable de anomalías citogenéticas que aparecen tras la influencia de agentes genotóxicos30.Los resultados de nuestro estudio confirmaron el informe de Liu et al.5, que sugirió que TFS induce toxicidad bioquímica y genotoxicidad.De manera similar, Çayır et al.38 revelaron que Pyraclostrobin, otro miembro de la familia de las estrobilurinas, acelera la formación de MN en linfocitos humanos.Daños cromosómicos inducidos por trifloxistrobina.MN (a), fragmento (b), cromosoma errante (c), cromosoma pegajoso (d), distribución desigual de la cromatina (e), puente (f), núcleo con vacuolas (g), polarización inversa (h), mitosis irregular (i).La prueba CAs, junto con la prueba MN, se encuentran entre los bioensayos genéticos más logrados con alta sensibilidad para impactos tempranos39,40.La evaluación de la genotoxicidad en raíces de A. cepa indicó que TFS causó varias CA (Fig. 2, Tabla 2).De hecho, incluso la dosis más baja de solución de TFS aplicada fue suficiente para inducir la producción de CA en las células de la raíz de A. cepa.La CA más observada en todos los grupos después de los tratamientos con TFS fue el fragmento (FR) (Fig. 2b, Tabla 2).FR no se encontró en el grupo de control similar a MN.Por otro lado, las diferencias entre las incidencias de FR de los grupos expuestos a TFS fueron significativas.Hubo una mejora sustancial en la frecuencia de cromosomas errantes (VCR) (Fig. 2c, Tabla 2) después de las administraciones de TFS.VCR fue la segunda CA más observada en todos los grupos expuestos a TFS y el aumento en la acumulación inducida por TFS fue dependiente de la dosis.Es bien sabido que FR es una mutación irreversible que eventualmente da como resultado la creación de MN41, mientras que la acumulación de VCR provoca la generación de núcleos de formas y tamaños diferentes con diferentes cantidades de cromosomas en las células hijas42.El cromosoma pegajoso (SCR) (Fig. 2d, Tabla 2), la tercera CA más vista en células de A. cepa después del tratamiento con TFS, es una aglomeración cromosómica que resulta de la degeneración o despolimerización del ADN43.Se caracteriza como un racimo que se forma debido al plegamiento inadecuado de las fibras cromosómicas en cromosomas individuales o fibras cromátidas44.Nuevamente, la dependencia de la dosis fue válida en el potencial de TFS para inducir cromosomas pegajosos (Tabla 2).Otro tipo de CA acumulado después de los tratamientos con TFS fue la distribución desigual de la cromatina (UDC) (Fig. 2e, Tabla 2).Según Dutta et al.45, el patrón UDC es una consecuencia de la falta de separación de las cromátidas durante la anafase y es un factor obvio para la generación de VCR.Las células que normalmente se dividen en el grupo de control no tenían puente (BR) (Fig. 2f, Tabla 2), núcleo con vacuolas (NVC) (Fig. 2g, Tabla 2), polarización inversa (RPL) (Fig. 2h, Tabla 2) o mitosis irregular (IM) (Fig. 2i, Tabla 2).Por otro lado, al igual que con otros tipos de CA, la frecuencia de tales aberraciones también tendió a aumentar con el aumento de las dosis de TFS en los grupos de tratamiento.BR, un signo visible de clastogenicidad o genotoxicidad, ocurre entre los cromosomas42 y conduce a cromosomas retrasados ​​debido a la formación de pegajosidad, cambio de cromátida desigual, cromosomas dicéntricos o roturas cromosómicas45,46.Malakahmad et al.47 señalaron que las rupturas de doble cadena en el ADN provocan la generación de reordenamientos o translocaciones cromosómicas, incluida la adherencia o el retraso.La NVC es una anomalía que surge de las disfunciones en la biosíntesis del ADN durante la etapa de síntesis del ciclo mitótico34, mientras que la RPL indica defectos en la organización de los husos48.Youssef y Elamawi et al.49 afirmaron que la CNV refleja daño citológico y puede estar relacionado con la ausencia de material genético en el núcleo.Según Rank et al.50, dos posibles mecanismos para la generación de CAs en células vegetales mitóticas dependen del mecanismo de acción del material genotóxico: los materiales aneugénicos interrumpen la formación de husos o impiden la unión de las tubulinas a los cinetocoros, mientras que los materiales clastogénicos desencadenan rupturas de ADN.De acuerdo con los resultados de nuestro estudio, todas las dosis de TFS indujeron ambas formas de formación de CA en las células de la raíz de A. cepa.Los efectos genotóxicos y citotóxicos de TFS en A. cepa nunca se habían estudiado previamente, sin embargo, Wu et al.9 informaron que TFS induce daño en el ADN de las lombrices de tierra.Además, Pérez et al.40 indicaron que un tipo diferente de estrobilurina, la azoxistrobina, desencadena CA relacionadas con fallas del huso, incluidos cromosomas rezagados y fallas en la congregación de cromosomas en el ecuador de la célula durante la metafase en Bidens laevis L. Ha También se ha informado que la azoxistrobina provoca daños en el ADN dependiendo de la dosis de aplicación del fungicida en el hígado del pez cebra51.Los aumentos inducidos por TFS en las frecuencias de CA y MN pueden ser las causas principales de la reducción de MI y el crecimiento de la planta en A. cepa porque disminuyen la viabilidad celular.La evaluación de los parámetros bioquímicos mostró que los tratamientos con TFS indujeron un estrés oxidativo sorprendente en las células de la raíz de A. cepa (Tabla 3).El estrés oxidativo se define como una alteración del equilibrio redox en las células que surge de la sobreacumulación de especies reactivas de oxígeno y una defensa antioxidante inadecuada52.Los tratamientos con TFS en todas las dosis provocaron elevaciones notables en las actividades catalíticas de SOD y CAT.Las actividades medias de SOD de los grupos tratados con 0,2 g/l de TFS, 0,4 g/l de TFS y 0,8 g/l de TFS fueron aproximadamente 1,2, 1,5 y 2,0 veces las del grupo de control, respectivamente.Por otro lado, las actividades CAT medias de los grupos tratados con 0,2 g/L TFS, 0,4 g/L TFS y 0,8 g/L TFS fueron aproximadamente 1,4, 1,8 y 2,4 veces las del grupo de control, respectivamente.Las enzimas SOD y CAT trabajan en equipo en el sistema antioxidante enzimático de las células.Mientras que la actividad SOD reduce el radical superóxido y produce peróxido de hidrógeno y dioxígeno, el peróxido de hidrógeno se consume rápidamente por la actividad catalítica de la enzima CAT53.Mohsin et al.54 sugirieron que dosis bajas de TFS ayudan a la defensa antioxidante en las células vegetales al mejorar la actividad antioxidante de las enzimas.De manera similar, la piraclostrobina redujo el estrés oxidativo al aumentar la actividad de la SOD en la cebada55.Además, Azoxystrobin exhibió un potencial protector en el trigo a través de la mejora de las actividades de las enzimas SOD, CAT y peroxidasa56.Por el contrario, varios estudios en animales acuáticos o terrestres han demostrado que TFS induce daño oxidativo5.Además, Li et al.57 revelaron que las actividades de SOD y CAT se redujeron en embriones de pez cebra después de tratamientos con estrobilurinas, incluido TFS.En nuestro estudio, TFS obviamente aumentó tanto las actividades de las enzimas antioxidantes como la acumulación de MDA de forma dependiente de la dosis (Tabla 3).La MDA es un producto de bajo peso molecular producido por la degradación de los lípidos de membrana durante el ataque de especies oxidativas reactivas sobre las membranas celulares58,59.Los niveles medios de MDA de los grupos tratados con 0,2 g/L TFS, 0,4 g/L TFS y 0,8 g/L TFS fueron casi 1,4, 2,1 y 2,7 ​​veces los del grupo de control, respectivamente.Mohsin et al.60 sugirieron que TFS reduce los niveles de MDA al apoyar las actividades de las enzimas antioxidantes durante el estrés salino en las plántulas de pepino.Por el contrario, la administración de TFS indujo la acumulación de MDA en pececillos raros debido a la aparición del estrés oxidativo61.Los estudios de microestructura celular en Chlorella vulgaris mostraron que TFS afectó negativamente la permeabilidad de la membrana y provocó lesiones irreversibles en las membranas celulares62.Hasta donde sabemos, nuestro estudio es el primero en demostrar un estallido oxidativo relacionado con TFS en raíces de A. cepa.Se puede suponer que estos resultados están relacionados con el contacto directo de las soluciones que contienen altas dosis de TFS con las raíces de A. cepa.Los tratamientos con TFS aplicados en todas las dosis alteraron la integridad del tejido meristemático de la raíz de A. cepa (Tabla 4, Fig. 3).Las células del meristemo de la raíz de los bulbos en el grupo de control parecían sanas (Fig. 3a-c), mientras que la epidermis estaba dañada (Fig. 3d), el núcleo celular aplanado (Fig. 3e), las células de la corteza dañadas (Fig. 3f) y el grosor de la corteza La pared celular (Fig. 3g) se detectó en meristemos de raíz expuestos a TFS.Todas las anomalías se encontraban en un nivel leve en el grupo tratado con 0,2 g/l de TFS.Por otro lado, en el grupo expuesto a 0,4 g/l de TFS, el daño de la epidermis y las puntuaciones del núcleo celular aplanado ascendieron a un nivel moderado y las células de la corteza dañadas y el grosor de la pared celular de la corteza permanecieron en el mismo nivel.Los daños en las células meristemáticas fueron más graves en el grupo de TFS 0,8 g/l.En este grupo, el daño en la epidermis y la planitud del núcleo celular alcanzaron puntos críticos, mientras que los daños en las células de la corteza y el grosor de la pared celular de la corteza fueron moderados.Aunque se ha demostrado que las estrobilurinas promueven el crecimiento de las raíces al actuar como auxinas en dosis bajas en muchas plantas28, TFS causó daño anatómico severo en A. cepa en dosis altas.Uçkun y Özmen63 afirmaron que la permeabilidad de la membrana y la osmorregulación se vieron afectadas debido al posible daño estructural de la membrana celular en los renacuajos de Xenopus laevis expuestos a TFS.Como se puede ver a partir de los resultados de MDA, la causa más probable del daño celular meristemático en las raíces es el daño a las membranas celulares por TFS.Además, un núcleo de forma inusual puede estar relacionado con la genotoxicidad.Baker64 mencionó que el engrosamiento de la pared de la corteza puede ser un mecanismo de defensa de las plantas para evitar la transferencia de químicos dañinos a otros tejidos.Los daños de las células meristemáticas, como la deformación de la epidermis, la pared celular de la corteza anormal, la necrosis, el tejido vascular poco claro y las células de la corteza con impurezas debido a los fungicidas, han sido previamente demostrados en A. cepa por Güç et al.65 y Demirtas et al.66.Daño celular meristemático inducido por Trifoxystrobin.Aspecto de células de epidermis sanas (a), aspecto de núcleo de células sanas (óvalo) (b), aspecto de células de corteza sanas (c), células de epidermis dañadas (d), núcleo de células aplanado (e), células de corteza dañadas (f) , espesor en la pared celular de la corteza (g).Este estudio reveló los peligros potenciales de TFS en la biota no objetivo mediante el uso de A. cepa, como organismo modelo.TFS indujo una falla notoria en el crecimiento, la estabilidad genética, el equilibrio oxidativo celular y la integridad del tejido meristemático.La toxicidad fomentada por TFS tendió a aumentar a medida que aumentaban las dosis de TFS.A pesar de los estudios previos que mencionaron los roles protectores de TFS en la tolerancia al estrés de las plantas junto con los efectos fungicidas, nuestros datos indicaron que TFS debe considerarse genotóxico y citotóxico en dosis altas.Por lo tanto, el fenómeno de Paracelcus "sola dosis facit venenum", que significa "solo la dosis hace el veneno", es válido para TFS.Lavtižar, V. et al.Respuestas del ciclo de vida de los dáfnidos al insecticida clorantraniliprol y sus productos de 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